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2024-3-14

一、精選內(nèi)毒素更低批次細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感，過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)細(xì)胞釋放炎癥因子、引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡。不僅如此，胎牛血清會(huì)經(jīng)?；蜷L時(shí)間作用于細(xì)胞，一旦內(nèi)毒素含量過高，細(xì)胞相當(dāng)于長期在“有在毒培養(yǎng)基”中生長，被內(nèi)毒素影響，細(xì)胞將處于“亞健康狀態(tài)”，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定與準(zhǔn)確性。因此，為保證細(xì)胞的健康，在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，應(yīng)該選用內(nèi)毒素含量盡可能低的血清，以保障實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。Ausbian®進(jìn)口特級胎牛血清，選擇內(nèi)毒素含量≤3EU/ml，澳洲進(jìn)口血源，曾經(jīng)是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目...

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PCRdi檢出限芻議現(xiàn)在，PCR試劑盒常用于各種檢測。其中di檢出限是PCR試劑盒一個(gè)重要的參數(shù)。PCRdi檢出限就是所能檢測到的靶標(biāo)的di值。di檢出限的確定應(yīng)通過定量標(biāo)準(zhǔn)品來完成。定量標(biāo)準(zhǔn)品一般是經(jīng)過嚴(yán)格標(biāo)定拷貝數(shù)的陽性DNA，梯度稀釋后進(jìn)行一系列的檢測，每個(gè)梯度做8個(gè)復(fù)孔，終確定條帶能否觀測到或確定Ct值。示例.PCR定量標(biāo)準(zhǔn)品（支原體）（MinervaBiolabs）接著可用Reed-Muench公式計(jì)算方法的檢測限（LOD50），lgLOD50=距離比例×稀釋對數(shù)質(zhì)檢的差+高于50%檢... 查看詳情 2020-11-17
如何選擇適合病毒疫苗生產(chǎn)的新生牛血清盡管無血清培養(yǎng)是疫苗生產(chǎn)工藝的發(fā)展趨勢，但仍有許多生產(chǎn)細(xì)胞仍采用基礎(chǔ)培養(yǎng)基+新生牛血清的培養(yǎng)工藝。新生牛血清營養(yǎng)豐富，可同時(shí)適合懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞，可為貼壁細(xì)胞提供粘附基質(zhì)，細(xì)胞也無需馴化。質(zhì)量較好的新生牛血清，可克服傳統(tǒng)認(rèn)為血清帶來的兩個(gè)不足：1.血清批次間的質(zhì)量變動(dòng)，帶來細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不確定性。這可通過提高每個(gè)批次的牛血清產(chǎn)量來部分克服。2.血清對細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染。可通過選擇低內(nèi)毒素牛血清、嚴(yán)格外源因子的檢查來解決。輻照能進(jìn)一步滅活可能的殘余病毒。細(xì)胞培... 查看詳情 2020-11-17
提早知道所培養(yǎng)細(xì)胞或培養(yǎng)基中是否有細(xì)菌污染的一種方法培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，要避免細(xì)菌污染。如果存在細(xì)菌污染，則培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯，細(xì)胞大多在24小時(shí)死亡。在以細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)為基礎(chǔ)的生物藥產(chǎn)業(yè)中，也需要進(jìn)行無菌檢查。傳統(tǒng)無菌檢查是采用TSA或TSB培養(yǎng)基培養(yǎng)的方法，一般需要培養(yǎng)14天，觀察是否有菌落生長或溶液渾濁。現(xiàn)介紹一種通過PCR進(jìn)行無菌檢查的方法，當(dāng)然該方法也是用于研究。即采用德國MB的細(xì)菌檢測試劑盒（OnarBacteriaDetectionKit）。它作為PCR試劑盒，針對的是細(xì)菌高度保守的16SrRNA序... 查看詳情 2020-11-17
PCR試劑盒靈敏度與方法驗(yàn)證概說 PCR方法已廣泛用于科研，在工業(yè)中也有不斷擴(kuò)大應(yīng)用的趨勢，它包括檢測一些病原體、檢測支原體污染、檢測細(xì)菌污染以及檢測殘留宿主DNA等。PCR在工業(yè)中的應(yīng)用主要存在一個(gè)方法驗(yàn)證的問題，尤其是靈敏度的驗(yàn)證。靈敏度不夠，就會(huì)發(fā)生漏檢。另外，PCR所直接面對的樣本是DNA，而非病原菌或DNA，因此還需要做DNA抽提，這也是要注意的。下面以支原體PCR檢測為例，略說說靈敏度的驗(yàn)證。藥典規(guī)定，生物藥廠的主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、生產(chǎn)終末細(xì)胞、檢定細(xì)胞、病毒種子批和病毒收獲液、細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)材料... 查看詳情 2020-11-16
支原體 DNA染色法及其優(yōu)缺點(diǎn) 支原體有多種檢查方法，其中熒光法檢測支原體DNA是藥典記載的方法，又被稱為DNA染色法或指示細(xì)胞培養(yǎng)法。它的原理和操作大致如下：將供試品接種于指示細(xì)胞（無污染的Vero細(xì)胞或經(jīng)國家藥品檢定機(jī)構(gòu)認(rèn)可的其他細(xì)胞，供試品應(yīng)對該細(xì)胞生長無影響。下面以Vero細(xì)胞為例）中培養(yǎng)后，用特異熒光染料（如Hoechst33258）染色。Vero細(xì)胞經(jīng)消化后，需制成每1ml含10的5次方的細(xì)胞懸液，以每孔0.5ml接種到6孔細(xì)胞培養(yǎng)板。每孔再加無抗生素DMEM培養(yǎng)基3ml，在細(xì)胞孵箱培養(yǎng)過夜，備... 查看詳情 2020-11-16
論適血清的篩選牛血清是重要的細(xì)胞培養(yǎng)添加成分，但目前牛血清的類型有胎牛血清、新生牛血清、補(bǔ)鐵新生牛血清等，其性能和價(jià)格均不相同。胎牛血清培養(yǎng)效果通常來說是jia。而補(bǔ)鐵新生牛血清對于一些細(xì)胞類型，其效果可等價(jià)于胎牛血清，或優(yōu)于常規(guī)新生牛血清。三種血清價(jià)格也各不相同。適血清的選擇，與各實(shí)驗(yàn)室、生產(chǎn)企業(yè)的條件和需求有關(guān)，與所培養(yǎng)細(xì)胞類型有關(guān)。除了以往根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和文獻(xiàn)報(bào)道，必要時(shí)也可進(jìn)行針對特定細(xì)胞的血清篩選試驗(yàn)，以篩選出jia血清。2020年8月《生物學(xué)雜志》第4期刊登了一篇《不同類型牛血清對M... 查看詳情 2020-11-16

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