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2024-3-14

一、精選內(nèi)毒素更低批次細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感，過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)細(xì)胞釋放炎癥因子、引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡。不僅如此，胎牛血清會經(jīng)常或長時間作用于細(xì)胞，一旦內(nèi)毒素含量過高，細(xì)胞相當(dāng)于長期在“有在毒培養(yǎng)基”中生長，被內(nèi)毒素影響，細(xì)胞將處于“亞健康狀態(tài)”，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定與準(zhǔn)確性。因此，為保證細(xì)胞的健康，在培養(yǎng)細(xì)胞時，應(yīng)該選用內(nèi)毒素含量盡可能低的血清，以保障實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。Ausbian®進(jìn)口特級胎牛血清，選擇內(nèi)毒素含量≤3EU/ml，澳洲進(jìn)口血源，曾經(jīng)是細(xì)胞典藏等重大項目...

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PCR檢查支原體是對藥典方法的重要補(bǔ)充支原體是導(dǎo)致體外細(xì)胞污染的重要污染源。用于生物制品生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)或治療性細(xì)胞。產(chǎn)品被支原體污染后，支原體或支原體代謝產(chǎn)物可進(jìn)入人體，并對人體產(chǎn)生嚴(yán)重危害。因此，對支原體污染的有效檢測是確保細(xì)胞基質(zhì)及治療性細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量的前提。支原體傳統(tǒng)檢測方法為培養(yǎng)法和指示細(xì)胞染色法，這兩種均是“藥典方法”。但缺點(diǎn)是耗時長，靈敏度低。此外，這兩種方法均無法明確所感染支原體的類型。因此，采用PCR或qPCR檢測支原體的高度保守序列，用于制藥工業(yè)的放行檢測，逐漸成為一種趨勢。當(dāng)然，核酸擴(kuò)增法也存在... 查看詳情 2020-11-13
DNA污染監(jiān)測的一種方法對于高靈敏的PCR技術(shù)來說，少量的DNA污染就可導(dǎo)致PCR假像或假陽性。污染的DNA來自于氣溶膠中DNA的片段。這些氣溶膠中的DNA可源自離心機(jī)、移液器和其它實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，或從PCR反應(yīng)管中飛濺出來。它們很難去除，并可能導(dǎo)致樣品之間的交叉污染。在擴(kuò)增過程中檢測到的單個外源DNA分子，就可給整個實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果詮釋帶來很多問題。不幸的是，即使是經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)室，DNA污染也會偶爾發(fā)生，并且只有當(dāng)PCR檢測到時，才會引起注意。值得指出的是，桌面和實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)，以及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中的... 查看詳情 2020-11-13
哪些細(xì)胞培養(yǎng)時，對內(nèi)毒素水平格外敏感胎牛血清主要的作用就是提供基本的營養(yǎng)物質(zhì)以及提供接觸和伸展因子，它是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段，血中含有豐富的生長發(fā)育因子，非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng)，一旦胚胎發(fā)育*這些因子自動消失。因此8個月胎齡以上的牛胚胎，已接近足月，不能作為胎牛血清的原料來使用。有下列情況者，對血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選：1.養(yǎng)干細(xì)胞時，干細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感，如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時，干細(xì)胞很容易死亡。很多使用者，在血清在試用前，就通過提早審核該批次《檢測報告... 查看詳情 2020-11-13
細(xì)胞培養(yǎng)時，鏡下有小黑點(diǎn)，怎么解決？有些實(shí)驗(yàn)人員報告，細(xì)胞培養(yǎng)時在鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點(diǎn)。這是有污染嗎?應(yīng)如何處理?一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，可采取下列步驟：首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動。如果細(xì)胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：(1)細(xì)胞生長過老，破碎的細(xì)胞殘骸;(2)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的... 查看詳情 2020-11-12
從以往PCR對支原體污染的檢測報道看方法驗(yàn)證的必要性以PCR為代表的核酸擴(kuò)增技術(shù)自1988年發(fā)明以來，已廣泛應(yīng)用于科研和臨床，但用于生物制藥則較晚，這是因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)化的建立需要一定的時間。國外已有不少藥廠將PCR或qPCR用于工業(yè)放行檢測中的支原體檢查。PCR的靈敏度、特異性、適用性和可靠性具有達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)的潛在可能。但需要按步驟和程序開展方法驗(yàn)證。有作者指出，有些PCR法在反應(yīng)條件及引物設(shè)計上，仍需不斷改良以提高其檢測效率。作者曾用半巢式PCR檢測70份支原體污染的樣本（主要為生物制品生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)），結(jié)果只檢出60份，說明PC... 查看詳情 2020-11-12
胎牛血清為什么要查牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）抗體一般胎牛血清檢查外源因子是一個重要方面，大部分外源因子都是微生物，有些是微生物的片段，如內(nèi)毒素，另有一種特別的外源因子，是牛病毒性腹瀉病毒（BVD）抗體，它還包括1型和2型。那么為什么要查這一因子呢？原來，許多疫苗是用細(xì)胞生產(chǎn)的。用細(xì)胞生產(chǎn)疫苗有成本低，含異源性成份少等優(yōu)點(diǎn)。但如果細(xì)胞苗生產(chǎn)中用的牛血清，含有特異性或有交叉性反應(yīng)的抗體及病毒抑制物，那么就會影響細(xì)胞苗的毒價。例如某廠在生產(chǎn)豬瘟羊腎細(xì)胞苗時就遇到了牛病毒性腹瀉/粘膜病(BVD/MD)抗體產(chǎn)生的干擾。由于牛病毒性腹... 查看詳情 2020-11-11

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